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I. Conditions de culture et d'expression de l'HSP22 recombinante chez Escherichia coli II. Effet des additifs (cuivre OU calcium ET/OU sorbitol)
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I. Conditions de
culture et d'expression de l'HSP22 recombinante chez Escherichia coli
1. La souche B834(DE3)pLysS a été cultivée, à 37°C, dans différentes conditions de milieu de culture, avec ou sans induction de l'expression de l'HSP22 recombinante par addition d'IPTG 0,4 mM. Un schéma synoptique du protocole détaille la procédure suivie. Le tableau I ci-dessous résume les différentes conditions de culture : |
Condition | sans IPTG : pas d'induction de l'expression de l'HSP22 recombinante | [IPTG] 0,4 mM : induction de l'expression de l'HSP22 recombinante | ||||||||||
sans sorbitol | [sorbitol] 500 mM (Gunasekera & Kemp, 1999) | sans sorbitol | [sorbitol] 500 mM | |||||||||
--- | [Cu] 0,2 mM (Lamb et al.,2000) | [Ca] 0,1 mM | --- | [Cu] 0,2 mM | [Ca] 0,1 mM | --- | [Cu] 0,2 mM | [Ca] 0,1 mM | --- | [Cu] 0,2 mM | [Ca] 0,1 mM | |
lettre schéma | A | B | C | D | E | F | G | H |
2. Pour chaque condition, deux aliquotes (1 mL) du milieu de culture ont été prélevés à différents temps de culture. Le témoin 0 heure est un échantillon prélevé juste avant d'induire ou non l'expression : voir le traitement des échantillons. 3. Sur chaque échantillon, les mesures suivantes ont été effectuées :
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II. Effet des additifs (cuivre OU calcium ET/OU sorbitol) II-A. Croissance de E. coli B834(DE3)pLysS et la concentration des protéines totales 1. Les courbes de croissance de E. coli B834(DE3)pLysS pour chacune des 12 conditions décrites dans le tableau I sont présentées dans la Figure 1. 2. La concentration en protéines totales a été mesurée pour chaque échantillon par la méthode de Bradford (Figure 2). Les valeurs reportées sur cette figure sont la moyenne de duplicate ou de triplicate (selon l'échantillon), après des cycles de congélation/décongélation. 3. Cependant, ni l'absorbance à 600 nm ni la concentration en protéines totales ne sont des paramètres significatifs en soit dans cette étude. En effet :
4. Pour tenir compte de ces différences, nous avons normalisé la concentration en protéines totales en la divisant par la valeur d'absorbance à 600 nm mesurée pour chaque échantillon au moment du prélèvement, soit le paramètre : [P] / A600. Les résultats sont présentés dans la Figure 3. |