L3 - Janvier 2003 - Enzymologie (8 points)
Un expérimentateur dispose d'une enzyme E et d'un substrat de cette enzyme, S.

Par ailleurs, il dispose de deux molécules A et B.

Il veut déterminer si :

  • 1ère possibilité : l'une des molécules A ou B est un second substrat et l'autre un inhibiteur.
  • 2ème possibilité : A et B sont deux inhibiteurs.

Il mesure la vitesse initiale de la réaction dans différentes conditions. Parmi les résultats obtenus, en voici certains.

A. Vitesse initiale de la réaction (en ÁM.min-1) pour différentes concentrations de S et de A :

[S]0 (mM)

[A]0 (nM)

6

10

21

0,66

3,40

5,00

8,33

1,40

4,76

6,90

10,20

10,20

6,80

9,09

12,82

 

B. Vitesse initiale de la réaction (en UA.min-1) pour différentes concentrations de S et de B (en présence de A à une concentration maintenue fixe) :

[S]0 (mM)

[B]0 (ÁM)

0

0,5

3

0,20

0,137

0,092

0,069

0,30

0,189

0,128

0,097

0,59

0,316

0,216

0,164

2,15

0,641

0,420

0,312

 

1. Si vous pensez que A ou B est un second substrat, ne faites que les représentations primaires. Déterminez les paramètres cinétiques auxquels vous avez accès. Donnez l'ordre de fixation des substrats.

2. Déterminez les paramètres cinétiques en absence d'inhibiteur (Vmax, KM et kcat). Déterminez les paramètres cinétiques en présence du ou des inhibiteur(s). Précisez le ou les type(s) d'inhibition et calculez la ou les constante(s) d'inhibition KI.

3. Proposez un schéma du mécanisme réactionnel tenant compte des molécules E, S, A et B et des différentes constantes déterminées.

Remarques :

  • a. Toutes les concentrations doivent être exprimées en molarité.
  • b. Inutile de tracer les courbes de saturation (représentation de Michaelis-Menten-Henri).

Données : l = 1 cm ; eMproduit = 1230 M-1.cm-1 ; [E]0 = 9 pM