Université d'Angers - Biochimie Métabolique - Septembre 2003

 

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Le tableau suivant donne les valeurs de vitesses initiales (en UA.h-1) d'une réaction catalysée par une enzyme E.

[A]0 (mM) [B]0 (ÁM)
0,3 0,5 0,8 1,05
0,027 2,00 3,03 4,29 5,41
0,039 2,56 3,85 5,29 6,45
0,066 3,55 5,08 6,71 8,00
0,14 5,00 6,90 8,55 9,71
1,02 7,30 9,10 10,75 12,05

Partie A : tracés graphiques et détermination des paramètres cinétiques

1ère possibilité : vous pensez que A ou B est un inhibiteur.

  • Déterminez les paramètres cinétiques en absence de l'inhibiteur (VMax, KM et kcat). Exprimez kcat en sec-1.
  • Déterminez les paramètres cinétiques en présence de l'inhibiteur.
  • Précisez le type d'inhibition et calculez la constante d'inhibition KI.

2ème possibilité : vous pensez que A et B sont deux substrats.

  • Tracez les représentations primaires ET la ou les représentation(s) secondaire(s).
  • Déterminez tous les paramètres cinétiques auxquels vous avez accès. Exprimez kcat en sec-1.

Partie B : schéma du mécanisme réactionnel

Une molécule C est un inhibiteur compétitif de A et une molécule I est un inhibiteur incompétitif de A.

  • Quelle que soit la possibilité que vous avez retenue, écrivez le schéma du mécanisme réactionnel complet en tenant compte des molécules E, A, B, C et I et des différentes constantes déterminées.
  • Quel est le type d'inhibition de C par rapport à B et de I par rapport à B ?

Données : [E]0 = 7 nM ; εMproduit = 16270 M-1.cm-1 ; l = 1 cm

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