L3 - Septembre 2004 - Enzymologie

Le tableau suivant donne les valeurs de vitesses initiales (en UA.h-1) d'une réaction catalysée par une enzyme E.

[A]0 (mM)

[B]0 (ÁM)

0,3

0,5

0,8

1,05

0,027

2,00

3,03

4,29

5,41

0,039

2,56

3,85

5,29

6,45

0,066

3,55

5,08

6,71

8,00

0,14

5,00

6,90

8,55

9,71

1,02

7,30

9,10

10,75

12,05

 

Partie A : tracés graphiques et détermination des paramètres cinétiques

1ère possibilité : vous pensez que A ou B est un inhibiteur.

  • Déterminez les paramètres cinétiques en absence de l'inhibiteur (VMax, KM et kcat). Exprimez kcat en sec-1.
  • Déterminez les paramètres cinétiques en présence de l'inhibiteur.
  • Précisez le type d'inhibition et calculez la constante d'inhibition KI.

2ème possibilité : vous pensez que A et B sont deux substrats.

  • Tracez les représentations primaires ET la ou les représentation(s) secondaire(s).
  • Déterminez tous les paramètres cinétiques auxquels vous avez accès. Exprimez kcat en sec-1.

 

Partie B : schéma du mécanisme réactionnel

Une molécule C est un inhibiteur compétitif de A et une molécule I est un inhibiteur incompétitif de A.

  • Quelle que soit la possibilité que vous avez retenue, écrivez le schéma du mécanisme réactionnel complet en tenant compte des molécules E, A, B, C et I et des différentes constantes déterminées.
  • Quel est le type d'inhibition de C par rapport à B et de I par rapport à B ?

 

Remarques :

  • Pour VMax la concentration doit être exprimée en molarité.
  • Inutile de tracer les courbes de saturation (représentation de Michaelis-Menten-Henri).

Données : [E]0 = 7 nM ; eMproduit = 16270 M-1.cm-1 ; l = 1 cm