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• Un mélange de molécules (appelées standard) de masse molaire connue est séparé par chromatographie de filtration sur gel (pics d'élution 1 à 7).
• Chaque pic est caractérisé par un volume d'élution V_e.
• Le volume d'exclusion du gel (V₀) est le volume d'élution d'une molécule non retardée, ici le bleu dextran.
• Le volume total du gel (V_t) est la somme du volume des billes et du volume externe aux billes. Il est donné par le volume d'élution d'une molécule qui diffuse totalement dans les billes (donc totalement retardée), ici la ruonosine.

• On définit le coefficient de partition : K_D = (V_e - V₀) / (V_t - V₀)
• On trace la droite étalon : log (masse molaire) = f (K_D) (ou masse molaire = f(K_D)) sur une échelle semi-logarithmique, comme représenté ici.
• La partie linéaire de cette droite (en rouge) permet de déterminer la masse molaire d'une molécule X dont le volume d'élution a été mesuré dans les mêmes conditions, en reportant son K_D.

Source des figures : Catalogue chromatographie (Waters®)

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