Enzymologie - Septembre 2004

Voir l'énoncé.

Partie A. Tracés graphiques et détermination des paramètres cinétiques
  • On remarque que quand la concentration de A augmente et celle de B augmentent, la vitesse initiale augmente : A et B sont deux substrats

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

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Il n'y a pas de graphe secondaire pour A puisque B se fixe en second.

A partir du graphe primaire pour B, on obtient les valeurs suivantes qui permettent de tracer le graphe secondaire pour B :

[B0] (µM) 1/[B0] (µM-1) 1/VMax[B0] (UA-1.min)
0,3 3,33 0,128
0,5 2 0,103
0,8 1,25 0,089
1,05 0,95 0,082

On trouve : VMax  = 15,63 UA.h-1 

D'après la relation de Beer - Lambert et avec εM = 16270 M-1.cm-1 et l = 1 cm :

                                      15,63
              VMax   =   --------------------   =   9,6 10-4 M.h-1 = 960 µM.h-1 = 0,27 µM.sec-1
                                   16270 x 1

                                                VMax
                 ==>   kcat   =   ----------------   =  38 sec-1
                                                 [E]0

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

Partie B. Schéma du mécanisme réactionnel tenant compte des molécules E, A, B, C et I et des différentes constantes déterminées
  KMA   KMB   kcat  
E   +   A   <======> EA   +   B <======> EAB ----------> E + P
   + C enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej   KI      + I enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej   KI        
         EC            EAI        

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