Les gels Sepharose et Sepharose 6B possède des bras espaceurs
a) AH - Sepharose est obtenu par formation d'une liaison covalente entre le 1,6 diaminohexane et le gel Sepharose par la méthode au bromure de cyanogène. Il possède un bras à 6 atomes de carbone et une amine libre à l'extrémité qui permet la fixation d'un groupe carboxyle.
b) CH - Sepharose est obtenu par formation d'une liaison covalente entre l'acide 6-aminohexanoïque et le gel Sepharose par la méthode au bromure de cyanogène. Il possède un bras à 5 atomes de carbone et un groupe carboxyle libre à l'extrémité qui permet la fixation d'un groupe amine primaire.
c) CH - Sepharose activé par un groupe succinimide (ester actif pour la fixation de groupe aminés).
d) Sepharose 6B activé par un groupe époxyde.
La présence d'un bras espaceur peut s'avérer critique pour la fixation correcte du ligand sur la protéine à purifier. Par exemple :
- L'acide UDP - glucuronique a été couplé à l'extrémité aminée du gel AH - Sepharose qui contient un bras à 6 atomes de carbone.
- Ce ligand a permis de purifier en une seule étape la collagène - glycosyltransférase de poulet.
- L'enzyme fixée a été éluée par compétition avec des fragments peptidiques du collagène.
Source des figures : "Chromatographie d'affinité", Pharmacia et "Enzymes" Pelmont (1995), Presses Universitaires de Grenoble
