Enzymologie - Janvier 2003

Voir l'énoncé.

A. Vitesse initiale de la réaction (en µM.min-1) pour différentes concentrations de S et de A
  • On remarque qu'il n'y a que S et A et quand la concentration de A augmente, la vitesse initiale augmente : A est un second substrat.

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

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B. Vitesse initiale de la réaction (en UA.min-1) pour différentes concentrations de S et de B (en présence de A à une concentration maintenue fixe)  
  • On remarque qu'il y a S et A et B.
  • Quand la concentration de B augmente, la vitesse initiale diminue : B est un inhibiteur.
  • [B] = 0 µM :    1/VMax =    1 UA-1.min  ==>  VMax  =    1 UA.min-1 
       D'après la relation de Beer - Lambert et avec εM = 1230 M-1.cm-1 et l = 1 cm :

                                        1
              VMax   =   ----------------   =   8,1 10-4 M.min-1 = 810 µM.min-1
                                  1230 x 1

                                               VMax
                 ==>   kcat   =   ----------------   =   9 107 min-1 = 1,5 106 s-1
                                                [E]0

  • [B] = 0,5 µM   :   VMaxapp   =   5,4 10-4 M.min-1 = 540 µM.min-1
  • [B] = 3 µM   :   VMaxapp   =   4,1 10-4 M.min-1 = 410 µM.min-1

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

Donc : VMax diminue et KMS est inchangé en absence et en présence d'inhibiteur (KMS= 1,25 mM)  ===> Il s'agit d'une inhibition non compétitive.

                                   VMaxapp   .    [B]0
          et :   KB   =   -----------------------------   =   1 10-6 M = 1 µM
                                    (VMax -VMaxapp)

C. Schéma du mécanisme réactionnel tenant compte des molécules E, S, A et B et des différentes constantes déterminées
                            KMS                                               kcat
        E   +   S   <======>   ES   +   A   <==>   ESA   ---------->   E + P
+ B enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej   KB                + B enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej   KB          + B enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej   KB
       EB   +   S  <======>  ESB   +   A <==>  ESBA

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