Correction Examen licence enzymologie janvier 2003 Emmanuel Jaspard biochimej biochimej

Université d'Angers - Biochimie Métabolique - Janvier 2003

A. Graphes primaires pour S et A

Quand la concentration de S et/ou de A augmente, la vitesse initiale augmente : A est un second substrat.
Les graphes primaires ci-dessous démontrent qu'il s'agit d'un mécanisme ordonné : S se fixe en 1er avec K_M^S = 1,25 mM.

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimejenzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

B. Vitesse initiale de la réaction pour différentes concentrations de S et de B (en présence d'une concentration maintenue fixe de A)

Quand la concentration de B augmente, la vitesse initiale diminue : B est un inhibiteur.

enzymology two substrate random ordered equilibre equilibrium enzyme enzymatique inhibiteur inhibition biochimej

[B] (µM)	1/V_max ou 1/V_max^app (UA^-1.min)	V_maxou V_max^app (µM.min^-1)	-1/K_M^S = -1/K_M^app = - 0,8 mM^-1 => K_M^S = K_M^app = 1,25 mM
0	1*	810*
0,5	1,49	540
3	1,97	410

*Exemple de conversion :

[B] = 0 µM - 1/V_max = 1 UA^-1.min => V_max = 1 UA.min^-1
Relation de Beer - Lambert (ε_M = 1230 M^-1.cm^-1 et l = 1 cm) : V_max = 1 UA.min^-1 / (1230 M^-1.cm^-1 x 1 cm) = 813 µM.min^-1

k_cat = V_max / [E₀] = (8,1 10^-4 M.min^-1 / 9 10^-6 M) = 90 min^-1 => k_cat = 1,5 s^-1

V_maxdiminue et K_M^S est inchangé en présence de l'inhibiteur B : il s'agit d'une inhibition non compétitive avec une constante d'inhibition K_I^B :

V_Max^app . [B]₀
K_I^B = ------------------- = 1 µM
(V_Max- V_Max^app)

C. Schéma réactionnel

K_M^S k_cat

E + S <=====> ES + A <=> ESA -------> E + P

K_I^B +B

K_I^B

EB + S <====> ESB + A <=> ESBA